2 × Rapid Taq Super Mix
Nomoro ea katse: HCR2016A
2 × Rapid Taq Super Mix e ipapisitse le Taq DNA Polymerase e fetotsoeng, e eketsang ntlha e matla ea katoloso, ntlha ea ntlafatso ea amplification le sistimi e ntlafalitsoeng ea buffer, e nang le bokhoni bo phahameng ba ho holisa.Lebelo la ho hodisa la dithempleite tse rarahaneng tse kang genome ka hare ho 3 kb le fihla ho 1-3 sec/kb, mme la dithempleite tse bonolo tse kang plasmids ka hare ho 5 kb le fihla 1 sec/kb.Sehlahisoa sena se ka boloka nako ea karabelo ea PCR haholo.Ka nako e ts'oanang, motsoako o na le dNTP le Mg2+, e ka holisoang feela ka ho kenyelletsa li-primers le li-templates, tse nolofatsang haholo mehato ea ts'ebetso ea teko.Ho feta moo, motsoako o na le dae ea electrophoretic indicator, e ka bang electrophoresis ka ho toba ka mor'a karabelo.Sehlahisoa se sireletsang sehlahisoa sena se etsa hore motsoako o boloke ts'ebetso e tsitsitseng ka mor'a ho qhoqha khafetsa le ho qhibiliha.Sehlopha sa 3'-end A sa sehlahisoa sa PCR se ka etsoa habonolo ka har'a T vector.
Likaroloana
2 × Rapid Taq Super Mix
Maemo a polokelo
Lihlahisoa tsa PCR Master Mix li lokela ho bolokoa ho -25 ~ -15 ℃ bakeng sa lilemo tse 2.
Litlhaloso
| Tlhaloso ea lihlahisoa | Rapid Taq Super Mix |
| Ho tsepamisa maikutlo | 2× |
| Hot Qala | E hahiloeng ka Hot Start |
| Overhang | 3'-A |
| Lebelo la ho arabela | Ka potlako |
| Boholo (Sehlahisoa sa ho Qetela) | Ho fihlela ho 15 kb |
| Maemo a lipalangoang | Leqhoa le omileng |
Litaelo
1. Mokhoa oa ho arabela (50 μL)
| Likaroloana | Boholo (μL) |
| Setšoantšo sa DNA* | loketseng |
| Sehlahisoa sa pele (10 μmol/L) | 2.5 |
| Reverse primer (10 μmol/L) | 2.5 |
| 2 × Rapid Taq Super Mix | 25 |
| ddH2O | ho ea ho 50 |
2.Amplification Protocol
| Lihato tsa potoloho | Mocheso (°C) | Nako | Lipotoloho |
| Boikemisetso ba tlhaho | 94 | 3 mets | 1 |
| Denaturation | 94 | 10 sec |
28-35 |
| Annealing | 60 | 20 metsotsoana | |
| Katoloso | 72 | 1-10 sec/kb |
E khothaletsoa ho sebelisa litempele tse fapaneng:
| Mofuta oa template | Karolo ea tšebeliso ea likarolo (50 μL reaction system) |
| Genomic DNA kapa E. coli mokelikeli | 10–1,000 ng |
| Plasmid kapa DNA ea kokoana-hloko | 0.5-50 ng |
| cDNA | 1-5 µL (ha e fete 1/10 ea kakaretso ea karabelo ea PCR) |
| Tšebeliso e khothalletsoang ea litempele tse fapaneng | |
Lintlha:
1.Tšebeliso ea reagent: qhibilihisa ka botlalo 'me u kopanye pele u sebelisoa.
2. Thempereichara ea annealing: Thempereichara ea annealing ke boleng ba Tm ea bokahohle, hape e ka behoa ka 1-2℃ ka tlaase ho boleng ba Tm ea pele.
3. Lebelo la Katoloso: Beha 1 sec/kb bakeng sa litempele tse rarahaneng tse kang genome le E. coli ka hare ho 1 kb;beha 3 sec/kb bakeng sa litempele tse rarahaneng tse kang 1-3 kb genome le E. coli;beha 10 sec/kb bakeng sa litempele tse rarahaneng ho feta 3 kb genome le E. coli.O ka beha boleng ho 1 sec/kb bakeng sa template e bonolo joalo ka plasmid e ka tlase ho 5 kb, 5 sec/kb bakeng sa template e bonolo joalo ka plasmid lipakeng tsa 5 le 10 kb, le 10 sec/kb bakeng sa template e bonolo. joalo ka plasmid e kholo ho feta 10 kb.
Lintlha
1. Bakeng sa polokeho le bophelo bo botle ba hau, ka kopo roala lijase tsa lab le liatlana tse lahloang bakeng sa ts'ebetso.
2. Sehlahisoa sena ke sa tšebeliso ea lipatlisiso FEELA!
